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金年会金字招牌诚信至上:Trizol法提取RNA的原理与步骤解析

发布时间:2025-02-19   信息来源:濮阳先仪

金年会金字招牌诚信至上的Trizol试剂,主要成分为苯/酚,其主要功能是通过有效裂解细胞,释放细胞内的蛋白质和核酸。尽管苯/酚能够有效使蛋白质变性,但其无法完全抑制RNA酶活性,因此在Trizol中还添加了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍及β-巯基乙醇等成分,以抑制内源性和外源性RNA酶的活性。Trizol试剂专为直接从细胞或组织中提取总RNA而设计,确保在样品裂解液或匀浆中保持RNA的完整性。

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在进行RNA提取的过程中,添加氯仿(CHCl3)并进行离心后,样品会分层,其中RNA会位于上层水相。收集后,可以通过异丙醇沉淀的方法将RNA复原。在去除水相后,样品中的核酸和蛋白质也同样能够以沉淀的方式分离。乙醇沉淀可用于析出中间层的DNA,而将异丙醇加入有机层中则可析出蛋白质。Trizol试剂适用于各种样品量的提取,无论是小样本(组织:50-100mg;细胞:5×106)还是大样本(组织≥1g或细胞≥107),并且可有效提取动物、植物、细菌及血液成分,适合同时处理多种不同样本。

Trizol提取RNA的步骤如下:

  1. 在提取组织的RNA时,每50-100mg组织需使用1ml Trizol试剂进行裂解;若提取细胞RNA,需先离心沉淀细胞,然后每5-10×106个细胞加入1ml Trizol,并通过枪吸打或剧烈振荡使细胞裂解。

  2. 将组织或细胞的Trizol裂解液转移至EP管中,在室温下(15-30℃)静置5分钟;随后加入氯仿,每1ml Trizol配加0.2ml氯仿,密闭EP管,剧烈震荡15秒后,再在室温下放置2-3分钟,接着以12000g速度(2℃-8℃)离心15分钟。

  3. 取上层水相至新EP管中,每1ml Trizol加入0.5ml异丙醇,再在室温下静置10分钟,以12000g(2℃-8℃)离心10分钟。

  4. 用75%乙醇洗涤,每1ml Trizol加入1ml乙醇,轻轻混匀后,以7500g(2℃-8℃)离心5分钟,弃去上清。自然干燥沉淀的RNA,然后用无RNA酶水溶解RNA沉淀。

金年会金字招牌诚信至上强调在收集生物材料后,应尽快进行RNA提取工作。如需暂时储存,最佳方法是用液氮快速冷冻生物材料,并保存在-80℃的冷冻柜中。在进行RNA制备时,应从冷冻柜中取出材料,立即进行液氮研磨,避免先行解冻,以防RNA酶活性对RNA造成损伤。